Tổng hợp Gblock/Gene Fragment

G-Block là những đoạn DNA sợi đôi được tạo nên ngẫu nhiên nhờ sự kéo dài các cấu trúc overlap của các đoạn Oligo (Building block của gene) thông qua sự xúc tác của enzyme High Fidelity Polymerase. Sản phẩm sau khi tổng hợp sẽ được kiểm tra trên gel điện di agarose để xác nhận đúng kích thước.

Ứng dụng:

• Chứng dương PCR / qPCR
• Làm khuôn tạo RNA
• Tạo dòng vào vector (cloning vector, expression vector)
• Dùng làm cassette gen trong vector
• Tạo biến thể (mutant / SNP / gắn tag)
• Tạo library biến thể (site-directed mutant library)

QUY TRÌNH ĐẶT DỊCH VỤ TỔNG HỢP GENE TẠI PHUSA GENOMICS

Tại PHUSA Genomics chúng tôi tiến hành xử lí đơn đặt hàng theo quy trình như sau:

1/ Khách hàng cung cấp trình tự cần tổng hợp thông qua hệ thống đặt hàng online.

2/ Bộ phận kĩ thuật kiểm tra trình tự cần tổng hợp

Trình tự gene Khách hàng yêu cầu sẽ được bộ phận kĩ thuật kiểm tra để xác định trình tự có chứa các yếu tố gây ảnh hưởng đến hiệu suất tổng hợp, lắp ráp hoặc sắp xếp hay không? Một số yếu tố gây ảnh hưởng có thể bắt gặp trong trình tự cần tổng hợp: Chi tiết vui lòng xem PHÂN TÍCH ĐỘ PHỨC TẠP CỦA TRÌNH TỰ GENE CẦN TỔNG HỢP bên dưới

3/ Phản hồi và xác nhận trình tự với Khách hàng

Trường hợp 1: Trình tự không chứa các yếu tố gây ảnh hưởng đến hiệu suất tổng hợp, lắp ráp hoặc sắp xếp (mục 2)

• Phí tổng hợp cho trường hợp này được tính theo giá đã niêm yết trên website PHUSA Genomics.
• PHUSA Genomics tiến hành Gởi đơn hàng và xác nhận đặt hàng với Khách hàng.
• Tiến hành tổng hợp theo yêu cầu khi nhận được xác nhận đặt hàng của Khách hàng.

Trường hợp 2: Trình tự chứa một trong những yếu tố gây ảnh hưởng đến hiệu suất tổng hợp, lắp ráp hoặc sắp xếp (mục 2) sẽ được định nghĩa là trình tự khó

• Chỉnh sửa trình tự

• Bộ phận kĩ thuật sẽ đưa ra hướng chỉnh sửa để Khách hàng loại bỏ các vấn đề ảnh hưởng đến quá trình tổng hợp của trình tự.
• Sau chỉnh sửa (1 hoặc nhiều lần, trình tự mới vẫn đáp ứng được nhu cầu khách hàng và không chứa các vấn đề ở mục 2).
• PHUSA tiến hành xử lí đơn hàng như Trường hợp 1

Trong trường hợp Khách hàng vẫn yêu cầu giữ nguyên trình tự gốc ban đầu

PHUSA có khả năng tổng hợp được trình tự khó: PHUSA Genomics sẽ tính thêm 30% phụ phí và ước tính thời gian tổng hợp. Các quy trình xử lí đều được thông báo tới khách hàng và đợi xác nhận đặt hàng của khách hàng trước khi tiến hành tổng hợp.

PHUSA Genomics sẽ từ chối nhận đơn hàng nếu trình tự đó PHUSA Genomics không thể tổng hợp được.

PHÂN TÍCH ĐỘ PHỨC TẠP CỦA TRÌNH TỰ GENE CẦN TỔNG HỢP

Trình tự gene Quý khách cần tổng hợp nếu rơi vào một trong các mục bên dưới thì trình tự cần tổng hợp này được định nghĩa là “trình tự khó tổng hợp”. Bộ phận kĩ thuật của PHUSA Genomics sẽ hỗ trợ Quý khách tìm ra hướng giải quyết tốt nhất. Nếu Quý khách vẫn có nhu cầu giữ nguyên trình tự gene khó này thì PHUSA Genomics sẽ tính phụ phí 30% tổng đơn hàng hoặc từ chối nhận đơn hàng tùy thuộc vào mức độ khó của trình tự.

1. %GC toàn trình tự.

%GC của toàn bộ trình tự thấp hơn 35% %GC của toàn bộ trình tự cao hơn 65%

2. GC phân bố không đồng đều trong trình tự.

Trình tự cần tổng hợp chứa khoảng 70 Nu liên tiếp có %GC thấp hơn 35%. Trình tự cần tổng hợp chứa khoảng 70 nu liên tiếp có %GC cao hơn 65%.

3. Chứa trình tự lặp quá dài.

Trình tự lặp nhiều hơn 10 nu.

4. Chứa nhiều nu cùng loại liên tiếp.

Trình tự chứa nhiều hơn 5G (hoặc 5C) liên tiếp ở bất kì vị trí nào.

5. Chứa cấu trúc bậc 2, cấu trúc kẹp tóc (Tm của cấu trúc >69°C).

6. Có vị trí cắt giới hạn lặp lại và vị trí methyl hóa Dam/Dcm